脫落酸ELISA檢測試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中指標水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，與HRP標記的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算濃度。

　　
 

　　來看看脫落酸ELISA檢測試劑盒是怎么操作的？

　　

　　1、標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可在小試管中進行稀釋。

　　

　　2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　

　　4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

　　

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

　　

　　6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

　　

　　7、溫育：操作同3。

　　

　　8、洗滌：操作同5。

　　

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

　　

　　10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

　　

　　11、測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。